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DNA凝胶成像的安全打开方式

发布时间:2019-02-14 阅读:378

    琼脂糖凝胶电泳分离技术是分子生物学实验室进行分离、鉴定和提纯DNA片段zui常用的方法。通过在制胶时掺入或制胶后染色的方式,使荧光染料结合在DNA分子上,在特定光源的照射下便可确定DNA分子的位置。

    早期,用于DNA琼脂糖凝胶染色的染料多为EB(溴化乙锭),EB可以嵌入到DNA分子碱基对之间,在紫外光的激发下发出强的荧光。EB由于其灵敏度高、稳定,而广受欢迎。但由于EB为强诱变剂,具有高致癌性,实验者在操作EB时往往“提心吊胆”。后期,EB逐渐被一些EB替代物如GoldViewGelRedGelsafe等所替代,此类替代物虽然毒性明显比EB降低,但大部分仍还是采用紫外光激发,实验操作者在观察凝胶尤其是切胶时还是会暴露在紫外下。我们知道紫外线照射,会导致基因突变,人体长时间接受紫外线的照射甚至会诱发皮肤癌。

    有没有什么既安全效果又好的方法?有!那就是蓝光成像

    蓝光成像,顾名思议,采用蓝光作为激发光源,所使用的与DNA结合的染料其zui佳激发波长在蓝光波段。下面就让小编给大家安利一下蓝光成像的好处。

    更安全

    常见的蓝光染料,其致突变性远低于EB数倍甚至数十倍。且此类染料zui佳激发波长多是在400-500nm的可见光,检测时采用可见蓝光激发,整个凝胶检测或回收过程中操作者无需暴露在紫外下, 避免紫外对人体损伤的可能。

    更灵敏

    常见的蓝光染料至少可检测出20pg~50pg DNA,检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右。SYBR Green I至少可检出20pg DNA, 灵敏度比EB染色法高1025倍。

    不会造成DNA损伤

    紫外光会造成核酸突变、缺刻等,影响下游的PCR扩增效率、产物回收、连接转化效率(某公司曾做过实验,将1.25 kb的基因片段在紫外光下暴露2分钟,再切胶回收、连接、转化,结果发现平板上的克隆数几乎为零)、RT-PCR扩增效率等。蓝光作为一种可见光对DNA样品无任何损伤,不会影响下游实验。

 

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