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非洲猪瘟检测PCR实验室的设计原则

发布时间:2019-07-22 阅读:413

PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密相连,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。

非洲猪瘟检测PCR实验室的设计原则:
1、非洲猪瘟检测实验室的选址
符合国家检测实验室的相关规定,具体适用于屠宰场来说,可选择办公楼或者独立的实验室空间,选址绝对不能和屠宰线相通,如果实验室阳性对照污染,会污染整个屠宰生产线,势必对屠宰场造成巨大的经济损失。
个别不专业的实验室设计建造公司因为不了解非洲猪瘟检测实验室的检测流程,造成设计布局不合理,对后期开展工作造成很大的不便及生物安全隐患。
2、主体结构
目前实验室的主体多为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金R50内角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。并且彩钢板结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
3、标准的四区分隔和气压调节
将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增区及产物分析检测区四个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
另外:
PCR实验室根据使用仪器的功能合理设置各个工作区域,如采用聚合酶联反应:则设置试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区四个单独的工作区域,这是zui常用的分区方式。样品需要粉碎处理的,还需增设样品粉碎区;若使用实时荧光PCR法:基因扩增区、基因产物分析区可以合并在一个房间内;采用标本处理、核酸提取及扩增检测为一体的全自动化PCR分析仪,则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并为一个区域,因此PCR实验室原则上设置五个区或四个区或三个区或二个单独的工作区。
核酸扩增前区和核酸扩增后区可设在一个房间内,但必须在满足下列要求的前提下:
a.核酸扩增前区实验室内设置两个不同位置的实验区,试剂配置在超净工作台中操作,样品处理在生物安全柜内操作。
b.在核酸扩增后区使用全封闭的扩增和检测系统,如实时荧光PCR仪等。
c.每个实验人员使用各自的试剂、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。
d.在实验前后对操作区域和共享器具进行清洁及消毒。
e.各区域的试剂、器具、仪器和设备为该区专用,不得交叉使用。
4、非洲猪瘟检测实验室的布局
非洲猪瘟检测实验室用的仪器为荧光定量PCR,因此核酸扩增和分析在一个区,实验室设计需要如下功能房间:PCR缓存走廊、带缓存间的配液室、带缓存间的样品处理室、带缓存间的核酸扩增分析区及实验室用具消毒室。
5、非洲猪瘟检测实验室生物安全保护
理论上讲非洲猪瘟检测实验室是BSL-2生物安全实验室,需要配置二级生物安全柜,推荐选择70%外排,30%内循环,各功能房间缓存设置更衣柜和消毒器,各区的实验服专用,物料流通需要配置带紫外线的互锁的传递窗,实行人流物流分开设置。
6、非洲猪瘟检测实验室消毒
在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
7、非洲猪瘟检测实验室机械连锁不锈钢传递窗
试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
8、非洲猪瘟检测实验室地面
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mm×800mm)接缝需要小于2mm。
9、非洲猪瘟检测实验室照明
灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。

验室各区功能及主要设备
1、试剂准备区:主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
对于气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
 2、样品制备区:主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
 3、扩增区:主要进行DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。
 4、扩增产物分析区:扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。    
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